La actividad neuronal requiere un constante reciclaje de vesículas sinapticas. Clásicamente, se acepta que las vesículas se reforman por endocitosis mediada por clatrina. En células neuroendocrinas, se ha demostrado que es posible la reutilización de vesículas secretoras al producirse la apertura y cierre directa del poro de fusión. Esta vía se ha denominado "kiss-and-run". Sin embargo, existe gran controversia si la vía de "kiss-and-run" existe en sinapsis del sistema nervioso central. Usando sensores intrínsecos de pH, al unir la GFP a dos proteínas de vesículas sinápticas, SinaptoFluorina y Sinaptofisina, hemos estudiado los mecanismos del reciclaje en neuronas de hipocampo en cultivo. Hemos utilizado la estimulación fisiológica para activar la transmisión sináptica, en lugar de aplicar "electro-shock" a las neurona en cultivo, al generar potenciales de accion en las mismas neuronas registradas y visualizadas. Observamos que la respuesta de los distintos botones sinápticos ante el estímulo fisiológico es heterogénea, a diferencia de la observada en condiciones de estimulación eléctrica masiva o por despolarización inducida por potasio. Los parámetros de fluorescencia obtenidos debido a la fusión de vesículas sinápticas, fueron heterógeneos, tendiendo a ser más uniformes a medida que se incrementa la intensidad y rango espacial de la estimulación. Estos datos sugieren que en condiciones fisiológicas, los botones sinápticos utilizan distintas vías de reciclado en función del grado metabólico y de actividad neuronal presente en la red neuronal. Hipotetizamos que la activación masiva del cultivo, "pone a cero" el sistema, eliminando diferencias generadas por la actividad previa en el cultivo.